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【行業(yè)掃盲】超速離心機(jī)

時(shí)間:2016年03月10日 信息來源:湘智離心機(jī) 字體: 打印此頁

一、簡(jiǎn)介


離心機(jī)是借離心力分離液相非均一體系的設(shè)備。根據(jù)物質(zhì)的沉降系數(shù)、質(zhì)量、密度等的不同,應(yīng)用強(qiáng)大的離心力使物質(zhì)分離、濃縮和提純的方法稱為離心。


一般說,離心機(jī)轉(zhuǎn)速在30000r/min以上的稱為超速離心。離心技術(shù),特別是超速離心技術(shù)是分子生物學(xué)、生物化學(xué)研究和工業(yè)生產(chǎn)中不可缺少的手段。


離心機(jī)作為一種手段,具有許多優(yōu)點(diǎn)。例如,超速離心可在低溫下操作,保護(hù)了生物大分子的活性。制備型的離心機(jī)負(fù)載量大,一次可分離提純幾克樣品,比層析、電泳上的樣品量大得多。


分析離心機(jī)不僅可測(cè)物質(zhì)的分子量,還可檢驗(yàn)物質(zhì)的純度、構(gòu)象、沉降系數(shù)等。因此離心技術(shù)在生物學(xué)研究中占有重要的地位,是分離、純化細(xì)胞、蛋白、核酸、酶和進(jìn)行病毒分離的最方便最有效的工具。


二、超速離心機(jī)的離心方法


用離心方法分離生物大分子和亞細(xì)胞物質(zhì)的基本原理是根據(jù)它們?cè)谝后w介質(zhì)中或者沉降速度不同而形成不同的區(qū)帶,或者它們的密度不同而停留在液體介質(zhì)中不同的位置而把它們一一分開。


前者是沉降速度法,應(yīng)用該法時(shí)液體介質(zhì)的最大密度要小于樣品中最小顆粒的密度,離心時(shí)選用高轉(zhuǎn)速和短時(shí)間;后者是沉降平衡法,應(yīng)用該法時(shí)液體介質(zhì)的最大密度要大于樣品中最小顆粒的密度,離心時(shí)選用較低轉(zhuǎn)速和較長(zhǎng)時(shí)間。


實(shí)際操作有幾種形式:


1、差速離心


這種方法是選擇不同轉(zhuǎn)速的離心,分別分離各個(gè)不同組分。例如先用低速沉降大顆粒和上清液,在高速離心上清沉降中等顆粒,最后超速離心上清沉降小顆粒。采用逐級(jí)提高離心力分離上情液的方法,把不同大小的顆粒分開。


這種方法比較簡(jiǎn)單,方便。分離的組份沉到管底,因此可以迅速濃縮所要的組份,減少體積。但回收率和純度是有矛盾的,要提高回收率,勢(shì)必提高轉(zhuǎn)速或延長(zhǎng)離心時(shí)間,這樣大小相近的顆粒也會(huì)沉到管底。因此該法多用于粗提純或初步濃縮樣品。


2、速度區(qū)帶(或速度梯度)離心


本法是將樣品放在一個(gè)連續(xù)的密度梯度液體上,通過離心,大顆粒沉降快,小顆粒沉降慢。經(jīng)過一段時(shí)間,相同的顆粒就在同一深度形成一條帶子,因此把各種組份分開來。

它適用于分離密度相同、而大小不同的物質(zhì),如不同的蛋白質(zhì)組份密度都差不多,但分子量不一樣,用本法很容易將其分開。但對(duì)密度不同、大小類似的物質(zhì)則不易分離。


蔗糖梯度是一種常用的介質(zhì)。用不同濃度的蔗糖溶液(5%-60%)配成梯度,用于梯度離心。再分別進(jìn)行收集處于不同區(qū)帶里的各個(gè)組份。


3、沉降平衡離心


這是靜力學(xué)的方法。在離心管中形成一個(gè)液體梯度,在離心時(shí)各組份以不同的速度下沉,但最終停留在與自己相同的密度中,形成一條狹窄的平衡帶,并保持相對(duì)的穩(wěn)定。為了使樣品所有組份都能達(dá)到它們的平衡位置,需要長(zhǎng)時(shí)間離心。


這種方法適用于分離大小相似但密度不同的物質(zhì),如核酸的分離。氯化銫梯度是常用于平衡離心的介質(zhì),分辨率很高,可區(qū)別密度相差0.05的組分,但離心時(shí)間需十幾到幾十小時(shí),且價(jià)格很貴。已有一種商品名叫"Percoll"的聚蔗糖溶液可以代替氯化銫梯度。該介質(zhì)能迅速形成梯度,使離心時(shí)間大大縮短到1-2h而仍有很好的分離效果。并且有配套的標(biāo)記珠(Density marker beads)可以測(cè)定樣品的密度。


三、離心機(jī)分類


依照轉(zhuǎn)速、容量、用途,可以大致分為分析型超速離心機(jī)、制倍型超速離心機(jī)、高速冷凍離心機(jī)、大容量冷凍低溫離心機(jī)、一般用普通低速離心機(jī)和臺(tái)式(高速、低速)離心機(jī)等。


1、分析型超速離心機(jī)


最高轉(zhuǎn)速在60000r/min以上,裝有懸掛式驅(qū)動(dòng)裝置。選速分級(jí)很精細(xì),速控和溫控精度高,配有鋁合金或鈦合金制造的二孔到六孔分析轉(zhuǎn)子。目前最新推出的Beckman Optima MAX-XP臺(tái)式超速離心機(jī)的最高轉(zhuǎn)速達(dá)到了1,500,000rpm(2,500轉(zhuǎn)/秒),而且運(yùn)行時(shí)非常安靜(噪音僅為47dBa),是較為先進(jìn)的分析機(jī)型。裝有完善的柱面透鏡光學(xué)系統(tǒng)、干涉光系統(tǒng)和紫外吸收掃描光學(xué)系統(tǒng),并能利用特別配制的數(shù)據(jù)處理微機(jī)自動(dòng)計(jì)算沉降系數(shù)和分子量等物 理參數(shù)。老型號(hào)機(jī)型有MSE~75型(已停止生產(chǎn))制備分析兩用超速離心機(jī)等。


2、制備型超速離心機(jī)


該機(jī)型從1955年開始商品化生產(chǎn)以來已發(fā)展到第五代產(chǎn)品。生產(chǎn)的制備用超速離機(jī)最高轉(zhuǎn)速可達(dá)83,000r/min,最大相對(duì)離心力場(chǎng) (R·C·F)S15,000×g以下,驅(qū)動(dòng)裝置壽命已達(dá)到200億轉(zhuǎn),同時(shí)配備有各種轉(zhuǎn)速和容量的鋁合金、鈦合金角度轉(zhuǎn)子、水平轉(zhuǎn)子、垂直轉(zhuǎn)子、區(qū)帶轉(zhuǎn)子及其它專用轉(zhuǎn)子。每種轉(zhuǎn)子配有多邊數(shù)百種的金屬或塑料離心管。


附屬設(shè)備可選配分析用光學(xué)裝置、密度梯度形成一 收集儀、用于區(qū)帶轉(zhuǎn)子操作的特種加樣一取樣器、密度梯度泵、積分儀和切管器等。新機(jī)型具有自動(dòng)化程度高(內(nèi)裝微處理程序控制機(jī))、壽命長(zhǎng)、噪音低、不需要水冷和故障率較低等優(yōu)點(diǎn)。


3、高速冷凍離心機(jī)


高速冷凍離心機(jī)一般在常壓空氣中旋轉(zhuǎn),具有大功率驅(qū)動(dòng)電機(jī)和制冷壓縮機(jī)。額定轉(zhuǎn)速在16,000--21,000r/min之間,轉(zhuǎn)子的最大線速度不超過 28Om/s(即在跨音速區(qū)以下,空氣擾動(dòng)小,易于控制)。這種離心機(jī)配備有鋁合金制造的各種轉(zhuǎn)子,包括角度轉(zhuǎn)子、水平轉(zhuǎn)子、垂直管轉(zhuǎn)子、連續(xù)流動(dòng)轉(zhuǎn)子、 區(qū)帶轉(zhuǎn)子和細(xì)胞淘洗轉(zhuǎn)子等,最大離心加速度在55,000xg以下。


四、離心機(jī)操作步驟和保養(yǎng)注意事項(xiàng)


操作步驟


1.接通電源,打開離心機(jī)蓋。

2.按要求裝配好離心管。

3.按要求安裝離心轉(zhuǎn)頭。

4.關(guān)上離心機(jī)蓋。

5.輸入離心數(shù)據(jù),編離心程序。

6.抽真空,并開始運(yùn)行程序。

7.程序結(jié)束后,去真空。

8.打開離心機(jī)蓋,取出轉(zhuǎn)頭。

9.取出離心管并進(jìn)行分析。


離心管的選用


玻璃離心管絕對(duì)不能在高、超速離心機(jī)上使用。

PA管:化學(xué)性能穩(wěn)定,半透明,能耐高溫消毒。

PP管:化學(xué)性能穩(wěn)定,半透明,能耐高溫消毒。

PC管:透明度好,硬度大,能耐高溫消毒。但不耐強(qiáng)酸強(qiáng)堿及某些有機(jī)溶劑。主要用于5萬(轉(zhuǎn)/分)以上離心。

CN管:質(zhì)地較軟,透明,但不耐強(qiáng)酸強(qiáng)堿及某些有機(jī)溶劑,不能高壓消毒。適合于蔗糖、甘油等密度梯度離心。應(yīng)透明,利于收集。

 

五、保養(yǎng)注意事項(xiàng)


1、如離心管蓋子密封性差液體就不能加滿(針對(duì)高速離心且使用角度頭),以防外溢。外溢后果污染轉(zhuǎn)頭和離心腔并失去平衡,影響感應(yīng)器正常工作

2、超速離心時(shí),液體一定要加滿離心管,應(yīng)超離時(shí)需抽真空,只有加滿才能避免離心管變形。

3、使用角度頭時(shí)別忘蓋轉(zhuǎn)頭蓋,如未蓋,離心腔內(nèi)會(huì)產(chǎn)生很大的渦流阻力和摩擦升溫,這等于給離心機(jī)的電機(jī)和制冷機(jī)增加了額外負(fù)擔(dān),影響離心機(jī)的使用壽命。

4、清潔離心機(jī)腔體和轉(zhuǎn)頭,并擦干腔內(nèi)冷凝水。

5、使用完后要打開門,直至腔內(nèi)恢復(fù)常溫。


------ 責(zé)任編輯:湘智離心機(jī)

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